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当前位置 〉 信息文章 〉蛋白交互作用分析系统 〉蛋白交互作用分析系统

  • 蛋白交互作用分析系统

  • 型 号:AB-1850
  • 厂 家:日本ATTO公司
    • 厂家介绍 /
    • 性能特点 /
    • 技术参数 /
    • 资料下载

    ATTO株式会社成立于1964年,是日本最大、世界最著名的电泳厂商之一,具有完整的常规电泳产品系列。作为日本顶级的电泳品牌,ATTO一直秉承着“世界信赖的品质”的精神,其产品凭借无与伦比的精致和可靠的性能,具有了超越其他品牌产品的实力,成为小型电泳产品的领航者。

    ATTO株式会社同样也是世界上最早研制荧光发光仪器的厂家之一。随着人类更深层次的探索生命的奥秘,荧光检测已成为一种非常有效的手段。ATTO依托先进的技术和强大的科研实力,连续开发出多款高端的荧光检测仪器,在应用上突破了传统荧光仪器的局限性,把这项技术又提高到一个新的水平,满足更高要求的科研工作要求。

    主要用于生物学领域的冷光和荧光检测波长测定:如

    FRET(荧光共振能量转移)分子设计的调查

    BRET(生物发光共振能量转移)分子设计的调查

    荧光/冷光试剂的发展和质量控制

    荧光/冷光反应的分析

     

    用途特征;

    1. 分光功能;同时测定相同条件下的测量范围内不同波长的光

    2. 一个冷CCD相机做为检测器,通过调节曝光时间即可增加检测灵敏度

    LumiFL-Spectro capture用一个高灵敏度的冷CCD做检测器,增加了灵敏度,同时有利于整个波长范围内的同时测量。这个单元是由光分离部分和检测装置做为基本结构;同时,如果客户需要测量的样品是靠荧光激发的,还能连接荧光激发光源进行测定(可选:请在要求中注明)。荧光样品的测定可以用石英材质的容器,冷光样品可以用塑料的小离心管。

     

    硬件特征:

    1、电子的冷CCD相机做为检测器

    2、CCD可以同时接收和检测整个目标波长范围区的所有光

    3、CCD比光电倍增管PMT有更高的量子效率

    4、所有波长同时检测,大大缩短了检测时间

    5、测定波长范围:400-800nm

    6、可以长时间曝光(提高了微小样品的检测灵敏度)

    7、如果装置荧光激发光源,还可以测定FRET或荧光底物

     

    与常规的分光计比较如下:

    要捕获弱光波长内的全部变化,必须要有测定小样品的高灵敏度的检测装置。常规的光度计是在把光分散后采用光电倍增管(PMT)一个个的检测,这样的话,敏感度大大降低,同时可能会由于以下原因没有达到一定光密度,导致样品不能侧定出光谱:

    (1)PMT的定量效率本身就比CCD低

    (2)测定时间短

    更重要的是,如果为补偿低灵敏度的不便而将扫描时间延长,冷光或荧光就会逐渐变细,反而得不偿失,得不到精确的光谱。

     

    LumiFL-Spectro capture

    常规光度计

    检测器

    冷的CCD

    PMT

    检测方式

    成批量

    一个一个地、顺序测定

    时间

    目标

    光强低的光

    高强度光

     

    样品测量:

    发光样品——滤光片元件组——细缝元件组——衍射光谱——所有波长的光通过冷CCD成批量检测

    1.样品可以在石英杯或者PCR管内测定;冷光样品(细胞或蛋白)都可以测

    2.聚光镜/滤光片:可以设定单片激发光滤片

    3.细缝元件组:可以聚集样品光

    4.衍射光栅:分离样品光

    5.检测元件:整个样品的光被分离后的光谱可经冷CCD同时测定;测量时间短,可以通过长时间曝光达到提高灵敏度的效果。

     

    举例:

    BRET样品的测定:

    当虫荧光素加到蓝色荧光素酶Vluc和黄色荧光蛋白YFP的融合蛋白上,荧光素和酶反应产生能量。一部分能量转移到YFP上,BRET反应就开始了。如果我们插入一小段包含目的序列(KR)的短肽片段,它可以转运酶PC1到Vluc-PC1这个复合蛋白上,识别并优先结合YFP的肽链序列。用AB-1850测定这个融合物的光谱,460nm下的Vluc冷光和527nm下的YFP都发出了强光,这样BRET反应被有力地证实了。接下来,PC1加入反应体系,527nm下的光减弱了,峰值变小。这个结果可以这样解释:PC1抢先结合到复合蛋白上,切断了能量转移到GFP上的通路,所以BRET的效率降低,通过检测数量的降低可以检测PC1的活性。

    生物技术领域的用途:

    BRET或FRET用途中的评估分子设计

    为完成BRET或FRET的实验,首先需要预实验阶段的检验分子设计。这种情况下,用光学滤光片检测冷光或荧光样品不可能把样品的全部发光波长都检测到,同时也不能过有效而充分地检测到能量转移期间波长的变化。而如果用AB-1850,这些就不成问题了,可以有效地进行分子设计。

    BRET或FRET:最近这两种技术成为热门,被广泛应用于分析蛋白间、蛋白和核酸间的联系,或者对蛋白进行修饰、剪切和空间构象改变后的功能研究。

    FRET是一种现象,从激发荧光的分子(供体)产生的光能量激活了其它荧光分子(受体),从而受体发光。它一般发生在受体和供体间存在一定的距离和空间关系,通过测定发出的光的波长,就可以判断FRET是否发生。

    BRET 中,荧光分子(供体)被冷光分子所取代,光也不是由供体发出,而是受体被冷光分子的冷光激活。BRET 中,如果冷光底物在测定时加入,检测就可以进行了,所以不需要高能量的激发光源装置。这样就降低了对样品的损伤。

    1.冷光、荧光测定装置

     F值  F3.0
     测量波长范围  400-800nm
     逆线性色散  60nm/mm
     波长分辨率  1.8nm
     重复性  ±0.6nm
     隙缝宽度  0.01nm-5nm(11步)
     曝光时间  1/20s----60min(26步)
     光接收装置  电子冷CCD

    2.光谱成像:

    衍射光栅数目:1个(标准)光栅:150pc/mm

    Braze 波长:500nm

    3.测量样品部分:

    测定器皿:石英杯(4mm*4mm)/ 0.2ml PCR管/ 35mm 培养皿

    样品体积:10ul-100ul

    瞬时冷光测定:注入孔(硅酮隔板)

    激发光源的连接:FC接管(标配)

    4.软件:

    功能:测量和光波数据分析

    接口: USB2.0

    5.体积和重量:

    大小:510mm(W)*725mm(D)*390mm(H)

    重量:58kg            

    电源:C100v  50/60Hz  290V

    6.标准配件:

    LumiFL-Spectro 光捕获系统:1台

    35mm 平皿实验组区:1PC

    方形细胞样品区:1PC

    PCR管样品区:1

    荧光测量时的滤镜托板:1

    AC绳:1

    USB接线:1

    瞬时荧光测定时需要用到的试剂加样接管:1

    石英容器:1

    PCR管:1袋

    为瞬时测定提供的试剂加样橡胶阀:1袋

    数据分析软件(CD版):1

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